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HPLC 常见故障及排除方法讨论整理

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HPLC 常见故障及排除方法讨论整理

Kinginsun:
HPLC 是做分析最常用的仪器,你在实验中遇到了什么问题、怎么解决的,请拿出来与
大家分享。
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luxinyanprc:
1.色谱柱跑干了,处理方法:将贮液瓶装入重蒸水,首先按purge 键,将柱前气柱排
出,若无法排出,可将色谱柱前拆下,用注射器抽吸。待柱前气体排空后,连接色谱柱,用
水高低流速交替冲洗色谱柱,直至柱压稳定为止。
2.基线不稳,有静电,处理方法:检查接地是否良好。
3.峰面积变化非常大,处理方法:检查是否进样阀堵塞。
4.基线突然提高,变粗,处理方法:检查样品池能量,若低于正常值,说明检测器污
染。
5.柱压变动范围较大,处理方法:多为进气泡。高低流速交替冲洗。
6.柱效或峰形突然变差,处理方法:更换预柱。
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☆叶落无声☆:
1.塔板数低 :色谱柱选择不对,二次保留、峰形不好的影响
2.色谱柱易变性:色说柱选择不对,二次保留的影响
3.色谱柱寿命短:色谱柱选择不对,样品需预处理(PH<3 或PH>7)
4.保留值变化:色谱柱平衡不够,流动相比例改变
5.出现新的干扰峰:初始分离不够或初始样品无代表性
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chenhb521:
选择波长要从以下几个方面考虑:
1.检测波长要大于溶剂截止波长。如果所选择的波长下溶剂有很强的吸收当然是不合
适的。溶剂有强吸收后,基线抬高,减小检测的线性范围而且会加大基线噪声,对溶质的检
测灵敏度下降。
2.对各组分都要有适当的吸收。一般是不可能做到的。所以只要选择一个对大多数组
分都有较大吸收的波长就可以了。
3.外标法定量时,要选择被测组份最大吸收波长。
254nm 对常见的共轭结构和羰基官能团都有吸收。对饱和基团也有弱的吸收。而对于
常见的乙腈、甲醇的透过率很高。是在不知道用什么波长时最理想的试验波长。

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studywang:
1、开泵后压力即升高至最高限度,经过对色谱柱前,色谱柱,色谱柱后的分段测试,
确定为检测池堵塞。
2、换检测波长后,色谱峰面积比以前做的小很多,怀疑进样环或管路漏夜,经检查,
排除,最后确定为,检测波长的显示值和实际值不符。

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张药师:
1.涡流扩散(Eddy diffusion)
流动相碰到较大的固体颗粒,就像流水碰到石头一样产生涡流。如果柱装填得不均匀,
有的部分松散或有细沟,则流动相的速度就快;有的部位结块或装直紧密则流就慢,多条流
路有快有慢,就使区带变宽。因此,固相载体的颗粒要小而均匀,装柱要松紧均一,这样涡
流扩散小,柱效率高。
2.分子扩散(Molecular diffusion)
分子扩散就是物质分子由浓度高的区域向浓度低的区域运动,也称纵向分子扩散。要
减少分子扩散就要采用小而均匀的固相颗粒装柱。同时在操作时,如果流速太慢,被分离物
质停留时间长,则扩散严重。
3.质量转移(Mass transfer)
被分离物质要在流动相与固定相中平衡,这样才能形成较窄的区带。在液相色谱中,
溶质分子要在两个液相之间进行分配,或在固相上被吸附和解吸附均需要一定的时间。当流
速快时,转移速度慢,来不及达到平衡动相就向前移,这各物质的非平衡移动,使区带变宽。
4.动相流速
当流速太低时,分子扩散严重,特别是在气相色谱中尤为突出。如将理论塔板高度对
流速作图,理论塔板高度随流速增加而急速下降,当达到最低值时,流速再加大则质量转移
起主要作用,理论塔板高度又加大。在高效液相色谱中,流速稍快影响不大,但在凝胶过滤
色谱中,因为物质要渗透到凝胶内部,所以质量转移影响大,流速咖大会降低柱效率。
5.固定相颗粒大小
定相颗粒越小柱效率越高,对流动相流动的阻力越大,需要加大压力才能使它流动
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luckyfeng:
公司有断时间为了节约,使用蒸馏水作为流动相组分之一。结果那段时间色谱图极不
稳定,会出现一些杂峰。(花了好长时间才查出问题的原因)
所以,HPLC 所用试剂的级别一定要高,避免不必要的麻烦!

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hope78:
由气味、景象和声音可以发现的问题。
你需要运用你所有的感官去发现液相色谱的问题。你最好养成习惯,每天花上几分钟
运用你的感官(除了味觉)来“感觉”你的液相色谱是否存在问题,这样可以帮助你迅速找
到问题所在。例如:在你看到漏液之前,你可能首先闻到它的气味。大部分的问题是可以通
过眼睛看到。


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最后编辑wei_wei_1983 最后编辑于 2009-05-17 12:38:10

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hope78: 进样阀可能发生的问题
问题可原因解决 方 法
A、手动进样阀,转动不灵
1、转子密封损坏
更换或调整转子密封
2、转子太紧调整转子的松紧度
B、手动进样阀,载样困难
1、进样阀安装不当
重新安装
2、定量环阻塞
清洗或更换定量环
3、进样器污染
清洗或更换进样器
4、管路阻塞清洗或更换管路
C、自动进样阀,不能转动
1、无压力(或电源)
提供恰当的压力(电源)
2、转子太紧调整转子的松紧度
3、进样阀安装不当
重新安装
D、自动进样阀,其它问题
1、阻塞
清洗或更换阻塞部件
2、机械故障见随机维修手册
3、控制器故障
维修或更换控制器

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Shyshll:
A.HPLC 柱压过高:
1.拆去保护柱,看柱压是否还高,否则是保护柱的问题,若柱压仍高,再检查;
2.把色谱柱从仪器上取下来,如果压力仍然不降,则是管路堵塞,须清洗,如果压力
下降了,将柱子的进出口反过来接再仪器上,用10 倍量柱体积的流动相冲洗柱子,如果柱
压仍不降,再检查;
3.更换柱子入口筛板,若柱压下降,说明溶剂获样品中含有固体颗粒,若柱压还高,
可在进样器与保护柱之间接一个在线过滤器。
B.基线不稳,上下波动或漂移:
1.流动相有溶解气体;用超声波脱气15-30 分钟;
2.单向阀堵塞,取下超声去除堵塞物;
3.泵密封损坏,造成压力波动,更换泵密封;
4.系统存在漏液点,确定漏液位置并维修;
5.流通池内有赃物或者杂质,清洗杂物;
6.柱后产生气泡,流通池出液口加负压调节器;
7.检测器没有设定在最大吸收波长处;
8.柱平衡慢,特别是流动相发生变化时。用中等强度的溶剂进行冲洗,更改流动相时,
在分析前用10-20 倍体积的心流动相对柱子进行冲洗。
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