HPLC 常见故障及排除方法讨论整理

luxinyanprc: 1.色谱柱跑干了，处理方法：将贮液瓶装入重蒸水，首先按purge 键，将柱前气柱排 出，若无法排出，可将色谱柱前拆下，用注射器抽吸。待柱前气体排空后，连接色谱柱，用 水高低流速交替冲洗色谱柱，直至柱压稳定为止。 2.基线不稳，有静电，处理方法：检查接地是否良好。 3.峰面积变化非常大，处理方法：检查是否进样阀堵塞。 4.基线突然提高，变粗，处理方法：检查样品池能量，若低于正常值，说明检测器污 染。 5.柱压变动范围较大，处理方法：多为进气泡。高低流速交替冲洗。 6.柱效或峰形突然变差，处理方法：更换预柱。

☆叶落无声☆: 1.塔板数低 ：色谱柱选择不对，二次保留、峰形不好的影响 2.色谱柱易变性：色说柱选择不对，二次保留的影响 3.色谱柱寿命短：色谱柱选择不对，样品需预处理（PH<3 或PH>7） 4.保留值变化：色谱柱平衡不够，流动相比例改变 5.出现新的干扰峰：初始分离不够或初始样品无代表性

chenhb521: 选择波长要从以下几个方面考虑： 1.检测波长要大于溶剂截止波长。如果所选择的波长下溶剂有很强的吸收当然是不合 适的。溶剂有强吸收后，基线抬高，减小检测的线性范围而且会加大基线噪声，对溶质的检 测灵敏度下降。 2.对各组分都要有适当的吸收。一般是不可能做到的。所以只要选择一个对大多数组 分都有较大吸收的波长就可以了。 3.外标法定量时，要选择被测组份最大吸收波长。 254nm 对常见的共轭结构和羰基官能团都有吸收。对饱和基团也有弱的吸收。而对于 常见的乙腈、甲醇的透过率很高。是在不知道用什么波长时最理想的试验波长。

studywang: 1、开泵后压力即升高至最高限度，经过对色谱柱前，色谱柱，色谱柱后的分段测试， 确定为检测池堵塞。 2、换检测波长后，色谱峰面积比以前做的小很多，怀疑进样环或管路漏夜，经检查， 排除，最后确定为，检测波长的显示值和实际值不符。

张药师: 1.涡流扩散（Eddy diffusion） 流动相碰到较大的固体颗粒，就像流水碰到石头一样产生涡流。如果柱装填得不均匀， 有的部分松散或有细沟，则流动相的速度就快；有的部位结块或装直紧密则流就慢，多条流 路有快有慢，就使区带变宽。因此，固相载体的颗粒要小而均匀，装柱要松紧均一，这样涡 流扩散小，柱效率高。 2.分子扩散（Molecular diffusion） 分子扩散就是物质分子由浓度高的区域向浓度低的区域运动，也称纵向分子扩散。要 减少分子扩散就要采用小而均匀的固相颗粒装柱。同时在操作时，如果流速太慢，被分离物 质停留时间长，则扩散严重。 3.质量转移（Mass transfer） 被分离物质要在流动相与固定相中平衡，这样才能形成较窄的区带。在液相色谱中， 溶质分子要在两个液相之间进行分配，或在固相上被吸附和解吸附均需要一定的时间。当流 速快时，转移速度慢，来不及达到平衡动相就向前移，这各物质的非平衡移动，使区带变宽。 4.动相流速 当流速太低时，分子扩散严重，特别是在气相色谱中尤为突出。如将理论塔板高度对 流速作图，理论塔板高度随流速增加而急速下降，当达到最低值时，流速再加大则质量转移 起主要作用，理论塔板高度又加大。在高效液相色谱中，流速稍快影响不大，但在凝胶过滤 色谱中，因为物质要渗透到凝胶内部，所以质量转移影响大，流速咖大会降低柱效率。 5.固定相颗粒大小 定相颗粒越小柱效率越高，对流动相流动的阻力越大，需要加大压力才能使它流动

luckyfeng: 公司有断时间为了节约，使用蒸馏水作为流动相组分之一。结果那段时间色谱图极不 稳定，会出现一些杂峰。（花了好长时间才查出问题的原因） 所以，HPLC 所用试剂的级别一定要高，避免不必要的麻烦！

hope78: 由气味、景象和声音可以发现的问题。 你需要运用你所有的感官去发现液相色谱的问题。你最好养成习惯，每天花上几分钟 运用你的感官（除了味觉）来“感觉”你的液相色谱是否存在问题，这样可以帮助你迅速找 到问题所在。例如：在你看到漏液之前，你可能首先闻到它的气味。大部分的问题是可以通 过眼睛看到。

hope78: 进样阀可能发生的问题
问题	可原因	解决 方 法
A、手动进样阀，转动不灵	1、转子密封损坏	更换或调整转子密封
2、转子太紧	调整转子的松紧度
B、手动进样阀，载样困难	1、进样阀安装不当	重新安装

	2、定量环阻塞	清洗或更换定量环
3、进样器污染	清洗或更换进样器
4、管路阻塞	清洗或更换管路
C、自动进样阀，不能转动	1、无压力（或电源）	提供恰当的压力（电源）
2、转子太紧	调整转子的松紧度
3、进样阀安装不当	重新安装
D、自动进样阀，其它问题	1、阻塞	清洗或更换阻塞部件
2、机械故障	见随机维修手册
3、控制器故障	维修或更换控制器

Shyshll: A．HPLC 柱压过高： 1.拆去保护柱，看柱压是否还高，否则是保护柱的问题，若柱压仍高，再检查； 2.把色谱柱从仪器上取下来，如果压力仍然不降，则是管路堵塞，须清洗，如果压力 下降了，将柱子的进出口反过来接再仪器上，用10 倍量柱体积的流动相冲洗柱子，如果柱 压仍不降，再检查； 3.更换柱子入口筛板，若柱压下降，说明溶剂获样品中含有固体颗粒，若柱压还高， 可在进样器与保护柱之间接一个在线过滤器。 B．基线不稳，上下波动或漂移： 1．流动相有溶解气体；用超声波脱气15-30 分钟； 2．单向阀堵塞，取下超声去除堵塞物； 3．泵密封损坏，造成压力波动，更换泵密封； 4．系统存在漏液点，确定漏液位置并维修； 5．流通池内有赃物或者杂质，清洗杂物； 6．柱后产生气泡，流通池出液口加负压调节器； 7．检测器没有设定在最大吸收波长处； 8．柱平衡慢，特别是流动相发生变化时。用中等强度的溶剂进行冲洗，更改流动相时， 在分析前用10-20 倍体积的心流动相对柱子进行冲洗。